为什么要做gstpulldown实验

微笑之普利西亚的回答：

因为此方法简单易行,操作方便。

gst pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。

其基本原理是将靶蛋白-gst（glutathione-s-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种「诱饵蛋白」,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的「捕获蛋白」(目的蛋白),洗脱结合物后通过sds-page电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,「诱饵蛋白」和「捕获蛋白」均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

️请教gst pull-down assay和免疫共沉澱的区别

飞鸿love巨集的回答：

gst pull-down一般指用一个带gst标籤的重组蛋白，与目的蛋白进行孵育，最后用结合gst的beads拉下相互作用複合物。

免疫共沉澱一般是用某一蛋白的抗体，在细胞裂解液中与相应的蛋白结果，用protein a/g将抗原抗体複合物拉下，最后在拉下的複合物中检测目的蛋白的实验。

二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。

区别是pull-down一般是验证 体外 相互作用；免疫共沉澱一般用于检测细胞水平的 体内 相互作用。

cofe_飞的回答：

两者原理和操作上都有一定的区别，比如做gst pull down的蛋白要有标籤，但是做免疫共沉澱就用不到，但是做免疫共沉澱需要额外準备抗体。（当然gst蛋白也需要準备抗体，毕竟事后要做wb的）

另外两者都可以测两种已知蛋白是否有相互作用或利用已知蛋白去调未知蛋白。本质上没什么区别，根据自己的情况选择吧。

最后一点要说的就是，co-ip比较好的一点，就是可以模拟体内互作的情况，结果更真实一点。

️免疫共沉澱和gst pull down技术各有何优势？

116贝贝爱的回答：

免疫共沉澱的话蛋白质是处于天然状态，可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白複合体。

gst pull-down是将gst融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上，与溶液中的目的蛋白结合。可以用来确定融合（或探针）蛋白与未知（或靶）蛋白间的新的相互作用。

一、免疫共沉澱是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

二、当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞记忆体在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose

beads上的蛋白质a的抗体免疫沉澱a蛋白，那么与a蛋白在体内结合的蛋白质b也能一起沉澱下来。再通过蛋白变性分离，对b蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。

三、这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

四、gst pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-gst（glutathione-s-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种「诱饵蛋白」。

五、目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的「捕获蛋白」(目的蛋白),洗脱结合物后通过sds-page电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,「诱饵蛋白」和「捕获蛋白」均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

️免疫共沉澱和gst pull down技术各有何优势

热心网友的回答：

都是用来研究蛋白质相互作用的技术

免疫共沉澱的话蛋白质是处于天然状态，蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免认为影响，还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白複合体。

但是问题是两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥樑作用；而且必须在实验前**目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，如果抗体选错了就没有结果。

gst pull-down是将gst融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上，与溶液中的目的蛋白结合。可以用来确定融合（或探针）蛋白与未知（或靶）蛋白间的新的相互作用，证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用。

但问题是这个方法可能会出现假阳性。也就是也许是因为电荷作用的影响造成的吸附，而不是生理性的相互作用。

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