筛选阳性克隆的方法和原理,什么叫阳性克隆筛选法请打击帮帮忙

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最常见的就是蓝白斑筛选，详细的楼主可参考这个

方法很多，除蓝白斑筛选外，像

菌落pcr验证：详见

从细菌里提取质粒后双酶切验证：用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切，电泳，观察条带是否和重组之前，目的基因电泳时条带所处的位置一致。

测序验证：送测序公司

️基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理.30

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蓝白斑筛选是bai

重组子筛选的一种du方法： 是根zhi据载体的遗传特徵筛dao选重组子，如α回-互补、抗生素基因等。现答在使用的许多载体都带有一个大肠桿菌的dna的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的调控序列和前146个氨基酸的编码资讯。

在这个编码区中插入了一个多克隆位点（mcs），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacz基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。

由α-互补而产生的lacz+细菌在诱导剂iptg的作用下，在生色底物x-gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源dna插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。

如用蓝白斑筛选则经连线产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

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明思道想的回答：

目的建立一抄个简便、可靠的重组袭阳性克隆的筛选方法.方法应用扩增小鼠生精细胞

凋亡相关基因时使用的引物,以基因重组扩增后得到的菌落为模板,直接进行pcr扩增.结果在筛选的阳性菌落中可扩增到与小鼠凋亡相关基因片段大小一致的阳性条带;以阳性克隆提取质粒进一步进行pcr和酶切鉴定及序列分析,证明结果正确.结论菌落pcr是一种简便、快速、可靠、有效的筛选重组阳性克隆的方法.

️基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆

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简单的说一下：

扩增目的基因，比如通过pcr的方法。

pcr扩增的序列可以通过酶切或者topo ta的方法插入到载体质粒。

转染大肠桿菌

筛选阳性克隆一般常採用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。

挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。

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